寡核苷酸類藥物非臨床研究策略：四家監(jiān)管機(jī)構(gòu)或組織的觀點(diǎn)比較和分析

寡核苷酸治療藥物（Oligonucleotide Therapeutics, ONTs）是一類成熟的藥物，通過(guò)與mRNA等分子靶點(diǎn)結(jié)合，調(diào)控特定致病蛋白或其變異體的表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療。從藥物分類與監(jiān)管現(xiàn)狀的角度，ONTs既不屬于傳統(tǒng)小分子，也不完全等同于生物大分子。不過(guò)，與生物藥有些相似，作用機(jī)制高度特異、藥效持久、模擬天然生物學(xué)通路。但又是化學(xué)合成所得，并常含化學(xué)修飾以提升穩(wěn)定性、效力和持久性。

目前行業(yè)普遍依據(jù)以下ICH指南開發(fā)ONTs：ICH M3(R2)、ICH S6(R1)。全球尚無(wú)專門針對(duì)ONTs的國(guó)際統(tǒng)一監(jiān)管指南。“ICH S13——寡核苷酸治療藥物的非臨床安全性評(píng)價(jià)”尚在起草階段。目前主要依賴：行業(yè)實(shí)踐、企業(yè)公開的非臨床數(shù)據(jù)、跨行業(yè)工作組白皮書（如OSWG、EFPIA ONT非臨床工作組）、已獲批產(chǎn)品的公開審評(píng)報(bào)告或者個(gè)別國(guó)家如日本的ONTs非臨床研究指南。

本文結(jié)合以下4個(gè)來(lái)源的文獻(xiàn)，對(duì)不同視角的寡核苷酸類藥物非臨床研究要求的異同點(diǎn)進(jìn)行回顧性分析。

日本PMDA于2020年發(fā)布的ONT專屬指南，《Guideline for preclinical safety assessment of oligonucleotide therapeutics》。

2024年，美國(guó)FDA發(fā)布的相關(guān)草案指南《Nonclinical Safety Assessment of Oligonucleotide-Based Therapeutics Guidance for Industry》。

中國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心與江蘇鼎泰2024年發(fā)表的《寡核苷酸藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)的一般考慮及案例分析》一文，CDE與其它企業(yè)也合發(fā)過(guò)類似文章，但時(shí)間較早，主要參考2024年這篇。

國(guó)際制藥創(chuàng)新與質(zhì)量聯(lián)盟（IQ Consortium）下屬的DruSafe ONT工作組2026年代表工業(yè)界觀點(diǎn)的《An Industry Perspective on Key Considerations for the ICH S13 Guidance: Nonclinical Safety Evaluations of Oligonucleotide-Based Therapeutics》一文。

總結(jié)如下表：

從上表看出，由于缺乏全球統(tǒng)一的指南，不同國(guó)家或者機(jī)構(gòu)、組織對(duì)寡核苷酸這類產(chǎn)品非臨床研究的要求或者理解還是有些區(qū)別的。工業(yè)界的觀點(diǎn)由于不代表監(jiān)管機(jī)構(gòu)，其訴求與監(jiān)管機(jī)構(gòu)之間的要求也不太一樣。挑幾個(gè)點(diǎn)稍作討論。

次要藥效學(xué)

CDE和日本PMDA里面沒(méi)涉及次要藥效學(xué)內(nèi)容。IQ DruSafe ONT工作組不推薦常規(guī)開展針對(duì)其他離子通道、GPCRs、轉(zhuǎn)運(yùn)體或酶的體外篩選。FDA則掰成兩半，對(duì)于通過(guò)核酸雜交發(fā)揮作用的 ONTs，通常不需要進(jìn)行典型的小分子藥物次要藥效學(xué)研究。對(duì)于非核酸雜交發(fā)揮作用的ONTs，如適配體，則要開展。這點(diǎn)，F(xiàn)DA的要求更合理一些。

安全藥理學(xué)

首先，4個(gè)渠道比較一致的觀點(diǎn)是需要評(píng)估心血管、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，可以整合入一般毒理研究開展。FDA還提醒在PD效應(yīng)最大化時(shí)以及 Tmax時(shí)進(jìn)行評(píng)估。當(dāng)然，F(xiàn)DA這個(gè)要求不僅適用于寡核苷酸這類藥物了，是個(gè)通用要求。

細(xì)微區(qū)別有兩點(diǎn)，一是什么情況下開展hERG，什么情況下豁免？二是局部給藥特殊場(chǎng)景的特殊要求。關(guān)于hERG，4家統(tǒng)一觀點(diǎn)是不作為常規(guī)推薦。言外之意，寡核苷酸類藥物作用于hERG的可能性及風(fēng)險(xiǎn)很低，研究意義不大。但是，什么情況下建議開展呢？IQ DruSafe ONT工作組建議當(dāng)靶標(biāo)/脫靶可能影響 hERG時(shí)或體內(nèi)遙測(cè)研究中觀察到QTc間期延長(zhǎng)時(shí)考慮開展。FDA認(rèn)為靶標(biāo)影響hERG或心臟蓄積時(shí)需開展。CDE和鼎泰這篇文章認(rèn)為若體內(nèi)發(fā)現(xiàn)心血管相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，可能需要開展hERG。PMDA認(rèn)為僅當(dāng)體內(nèi)心血管評(píng)估有發(fā)現(xiàn)時(shí)考慮體外驗(yàn)證。可以看出，CDE和PMDA描述類似，只有在體內(nèi)看到心血管安全性信號(hào)，再回頭做下hERG交叉確認(rèn)。IQ DruSafe ONT工作組和FDA則要求更嚴(yán)格，從靶點(diǎn)或脫靶風(fēng)險(xiǎn)角度作為額外約束，只要候選藥物有潛在影響心臟鉀離子通道的風(fēng)險(xiǎn)，就應(yīng)開展hERG研究。二者相比，F(xiàn)DA看似更為嚴(yán)格一些，如果藥物有心臟蓄積，無(wú)論是否看到心血管安全性信號(hào)，都應(yīng)開展hERG研究。關(guān)于局部給藥特殊場(chǎng)景的要求，IQ DruSafe ONT工作組和PMDA壓根沒(méi)提。CDE這篇簡(jiǎn)單提了一句，對(duì)于高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)景（如中樞分布）需單獨(dú)開展。FDA則認(rèn)為，局部給藥（如鞘內(nèi)、吸入）需強(qiáng)化對(duì)應(yīng)器官系統(tǒng)評(píng)估。只看到這里，兩個(gè)機(jī)構(gòu)的觀點(diǎn)是類似的。但FDA保留了一定的豁免靈活性，對(duì)于特征明確的 ONT 類別，若采用局部給藥（如玻璃體內(nèi)注射或局部涂抹）且已證明全身暴露量可忽略不計(jì)，則可能不需要傳統(tǒng)的安全藥理學(xué)研究。

動(dòng)物種屬選擇

需要進(jìn)行嚙齒類+非嚙齒類的研究，且其中一種最好是藥理學(xué)相關(guān)動(dòng)物種屬，即至少1種種屬能評(píng)估在靶毒性，一種評(píng)估脫靶毒性，這點(diǎn)大家是統(tǒng)一的。沒(méi)有藥理學(xué)相關(guān)動(dòng)物種屬怎么處理呢？建議同樣在嚙齒類+非嚙齒類開展研究，測(cè)試臨床候選藥物，以識(shí)別非雜交依賴的效應(yīng)（如免疫刺激或蛋白結(jié)合引起的毒性）。這種情況，需要開發(fā)一款替代分子，在其中1個(gè)種屬中伴隨考察在靶毒性。以上內(nèi)容，4個(gè)來(lái)源的要求類似。區(qū)別在于，工業(yè)界還有些更具體的訴求，比如是否某些場(chǎng)景下可以支持單物種研究，比如無(wú)相關(guān)種屬/無(wú)替代分子（FDA不允許），亞慢性研究無(wú)不良毒性（似乎可行，比如3個(gè)月雙種屬無(wú)毒，6或9個(gè)月采用單種屬），偶聯(lián)抗體的某些場(chǎng)景等。

重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)

首先關(guān)于高劑量的設(shè)置，出現(xiàn)了很大的分歧。IQ DruSafe ONT工作組建議參照ICH S6，F(xiàn)DA則建議參考ICH M3(R2)，PMDA也是偏向ICH M3(R2)。CDE則比較巧妙的避開這個(gè)爭(zhēng)議話題，畢竟不是正式的指導(dǎo)原則文件。工業(yè)界的論點(diǎn)很清晰，ONTs血漿PK與組織PD脫鉤。血中快速清除，但組織暴露持久、藥效長(zhǎng)期維持；M3(R2)基于50倍AUC安全邊際，適用于小分子，但對(duì)ONT毒性由組織內(nèi)作用決定，非血漿暴露，機(jī)制上不相關(guān)。而且，技術(shù)上也不可行（遞送系統(tǒng)飽和，無(wú)法達(dá)到高AUC），易引發(fā)種屬特異性假象（如猴特異性補(bǔ)體激活），降低臨床相關(guān)性，增加不必要的動(dòng)物使用。

給藥頻率設(shè)計(jì)方面，F(xiàn)DA認(rèn)為ONTs在動(dòng)物中的半衰期通常比人體短，給藥頻率可能高于人體，建議用PD生物標(biāo)記物指導(dǎo)給藥頻率設(shè)計(jì)。PMDA則認(rèn)為藥頻率參照預(yù)期人體PK。很明顯，F(xiàn)DA的要求更為合理一些。

關(guān)于恢復(fù)期的設(shè)計(jì)，IQ DruSafe ONT工作組提出了一些豁免恢復(fù)期組別設(shè)計(jì)的場(chǎng)景。不過(guò)，監(jiān)管機(jī)構(gòu)均未接這個(gè)茬。

遺傳毒性

FDA、NMPA、PMDA均認(rèn)為純天然核酸 ONT 無(wú)需開展，化學(xué)修飾 ONT 需遵循ICH S2(R1)開展。IQ DruSafe ONT工作組則認(rèn)為如果化學(xué)修飾已有充分遺傳毒性數(shù)據(jù)支持其安全性，無(wú)證據(jù)表明其靶點(diǎn)或潛在脫靶機(jī)制具有遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)，也不需要開展。只有采用了新型化學(xué)修飾的才需要開展。而且，IQ DruSafe ONT工作組認(rèn)為即使需要開展體內(nèi)微核，也建議整合入一般毒理研究，不必單獨(dú)開展。IQ DruSafe ONT工作組建議個(gè)人認(rèn)為避免了對(duì)化學(xué)修飾ONTs的一刀切，更合理一些。

致癌性

其中一個(gè)比較大的分歧是關(guān)于替代分子的致癌性研究。FDA認(rèn)為無(wú)相關(guān)種屬時(shí)可用替代分子評(píng)估與預(yù)期藥理相關(guān)的腫瘤風(fēng)險(xiǎn)，設(shè)計(jì)中應(yīng)同時(shí)包含替代分子和臨床候選藥物。IQ DruSafe ONT工作組不鼓勵(lì)使用嚙齒類替代分子進(jìn)行致癌性研究，理由同ICH S6(R1)對(duì)生物藥的規(guī)定，同源產(chǎn)品在致癌性研究中價(jià)值有限。NMPA和PDMA未涉及這一話題。

免疫原性/免疫毒性

這里只提兩點(diǎn)。一是免疫毒性指標(biāo)不是大而全的測(cè)，推薦細(xì)胞因子和補(bǔ)體。二是ADA檢測(cè)，IQ DruSafe ONT工作組認(rèn)為當(dāng)出現(xiàn)TK特征顯著改變，或PD反應(yīng)異常，或出現(xiàn)無(wú)法解釋的毒性是考慮檢測(cè)ADA。FDA個(gè)人認(rèn)為也是傾向于看到對(duì)PK/PD產(chǎn)生影響時(shí)，再關(guān)注ADA檢測(cè)。究其原因，已上市ONTs的ADA對(duì)PD、藥效或安全性的影響很小。當(dāng)然，這些都需要最新的ICH S13明確，何時(shí)檢測(cè)ADA，還是作為常規(guī)毒理終點(diǎn)之一考察。

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