藏藥破解腦缺血難題：成都中醫藥大學解密25味藥如何“瞄準”一個關鍵通路實現神經保護！

【寫在前面】：本期推薦的是由成都中醫藥大學等研究團隊合作近期發表于Phytomedicine(IF8.3）的一篇文章，揭示通過大鼠實驗證明，藏族藥方二十五味珊瑚丸通過調節 GRP78/XBP1/CHOP 信號通路減輕內質網應激，從而緩解腦缺血損傷。

【期刊簡介】

【題目及作者信息】

Ershiwuwei Shanhu pills alleviates cerebral ischemia injury in rats by regulating endoplasmic reticulum stress through GRP78/XBP1/CHOP pathway

背景

二十五味珊瑚丸（藏文名：???????????????，簡稱ESWWSHW）是一種用于治療腦缺血的傳統藏藥復方，主要由25味藥材組成，包括14種植物藥和11種礦物藥。該方劑于公元8世紀由玉妥·云登貢布創立，后被收錄于藏醫經典《四部醫典》，并載入《中華人民共和國藥典》（2020年版第一部）。其功效為開竅通絡、止痛，臨床上主要用于治療“白脈病”（藏醫病名，涵蓋腦缺血）、神志不清、頭痛、癲癇及各類神經性疼痛，然而其抵抗腦缺血損傷的具體分子機制至今仍未明確。

目的

本研究旨在系統闡明二十五味珊瑚丸抗腦缺血損傷的藥效物質基礎及其作用機制，特別是探索其是否通過調節內質網應激介導的細胞凋亡途徑來發揮腦保護作用。

方法

研究首先采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質譜（UPLC-Q-TOF-MS）對二十五味珊瑚丸的化學成分及其入血成分進行定性分析，同時利用高效液相色譜-三重四極桿質譜（HPLC-QqQ-MS）對12批次樣品的27種化學成分進行定量測定。在動物實驗中，將SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、尼莫地平陽性藥組及二十五味珊瑚丸低、中、高劑量組，采用線栓法建立大腦中動脈阻塞（MCAO）腦缺血再灌注模型。藥效學評價指標包括腦梗死比率和神經行為學評分。機制研究方面，綜合運用代謝組學和蛋白芯片技術篩選差異代謝物與蛋白，并通過對腦組織（間腦、皮質、海馬）進行病理學檢查、TUNEL染色（檢測凋亡）以及聚合酶鏈式反應（PCR）、蛋白質印跡（WB）和免疫熒光（IF）等分子生物學技術，驗證藥物對內質網應激-凋亡通路的影響。

結果

研究發現，從二十五味珊瑚丸中定性鑒定出76種化學成分，其中7種原型成分可入血，49種可分布至各組織（包括腦組織）。藥效實驗證實，該藥能顯著改善MCAO模型大鼠的神經行為學缺損，降低腦梗死率，減輕腦皮層和海馬區的神經元病理損傷，并減少皮層凋亡細胞數量。機制上，代謝組學分析鑒定出14個差異代謝物，主要富集于鞘脂代謝和甘油磷脂代謝通路；蛋白芯片篩選出18個差異表達蛋白，網絡分析提示IL-10、IL-3、IL-7可能是關鍵靶點。分子生物學檢測進一步顯示，二十五味珊瑚丸能顯著上調缺血腦組織中ATF6、XBP1、BCL2的mRNA表達，下調CHOP、GRP78、BAX、NLRP3的蛋白表達，并上調XBP1蛋白表達，表明其核心作用與調控GRP78/XBP1/CHOP這一內質網應激信號通路密切相關。

結論

本研究表明，二十五味珊瑚丸對腦缺血損傷的保護作用，是通過調節鞘脂和甘油磷脂代謝、影響炎癥相關因子（如IL-10、IL-3、IL-7），并最終通過抑制GRP78/XBP1/CHOP信號通路介導的內質網應激性細胞凋亡來實現的。該研究從現代科學角度揭示了這一傳統藏藥復方治療腦缺血的作用機制。

【前言】

根據天文歷法指導，藏醫藥師會依據時辰服用不同的藏藥制劑，以達到更佳的治療效果。例如，藏醫治療腦缺血疾病時，常聯合使用“七十味珍珠丸或二十五味珍珠丸”與“二十五味珊瑚丸或珊瑚七十味丸”。通常，七十味珍珠丸在清晨6時左右服用，二十四味沉香丸在上午8時左右服用，如意珍寶丸在中午12時左右服用，二十味沉香丸則在晚上8時左右服用。根據患者其他癥狀，還會輔以其他適宜的藏藥制劑。其中，二十五味珊瑚丸具有非常重要的地位。然而，我們課題組已對七十味珍珠丸開展了較多研究（Liang等，2019a，2019b，2023；Xu等，2020），并對二十五味珍珠丸進行了一些研究（Liang，2023a；Liang等，2024；Feng，2024）。盡管二十五味珊瑚丸在臨床上常用于治療腦梗死（Tan，2020；Zhu等，2020），但相關文獻卻不多見。目前，我們團隊啟動了對二十五味珊瑚丸的研究，旨在不僅闡明其作用機制與活性成分，也為后續揭示不同藏藥配伍組合的科學性奠定基礎。

【結果部分】

1.利用UPLC-Q-TOF-MS技術成功建立了二十五味珊瑚丸（ESWWSHW）及其混合對照品的正、負離子基峰離子流圖，完成了制劑化學成分的定性分析基礎。

2. 明確了ESWWSHW中76種已鑒定化學成分的可能裂解途徑，為后續指認入血入腦成分提供了關鍵質譜信息。

3. 在大鼠腦缺血24小時后，鑒定出7種草藥原型成分入血，49種成分進入各組織（包括5種入腦），提示這些成分可能是其治療缺血性中風的潛在藥效物質基礎。

4. 對12批ESWWSHW中27種化學成分進行定量分析，發現藏紅花素和羥基紅花黃色素A的含量普遍較高，而烏頭堿含量較低，且不同廠家的制劑存在成分差異。

5. 發現ESWWSHW能顯著回調腦缺血大鼠血漿中14種差異代謝物（如半乳糖神經酰胺、1-磷酸鞘氨醇等），這些代謝物主要涉及鞘脂代謝和甘油磷脂代謝兩條關鍵通路。

6.篩選出18個差異表達蛋白，并通過蛋白互作網絡分析確定IL-10、IL-3和IL-7可能是ESWWSHW干預腦缺血損傷的關鍵炎癥相關靶點。

7. 藥效學實驗證實，ESWWSHW能劑量依賴性地顯著降低腦缺血再灌注模型大鼠的腦梗死率。

8.ESWWSHW能改善腦缺血皮層神經元的變性壞死，增加尼氏體數量，并顯著抑制皮層細胞的凋亡。

9.在分子層面證實，ESWWSHW能上調腦組織中ATF6、XBP1、BCL2的mRNA表達，同時下調CHOP、GRP78、BAX、NLRP3的蛋白表達，并上調XBP1蛋白表達。

10.ESWWSHW通過調節GRP78/XBP1/CHOP信號通路介導的內質網應激與凋亡，是其發揮腦缺血保護作用的核心機制。

【結論與討論】

綜上所述，本研究的結論與討論部分綜合表明，二十五味珊瑚丸（ESWWSHW）通過多成分、多靶點、多通路的協同作用，對腦缺血再灌注損傷發揮保護作用。具體而言，研究首先通過UPLC-Q-TOF-MS和HPLC-QQQ-MS技術系統鑒定了ESWWSHW中的76種化學成分，并定量分析了12批次制劑中27種成分的含量，確認藏紅花素和羥基紅花黃色素A為主要成分；體內分析進一步揭示，在腦缺血模型大鼠中，有7種原型成分入血，49種成分進入各組織（包括5種入腦成分），提示這些成分可能是其發揮藥效的物質基礎。藥效學實驗證明ESWWSHW能顯著改善神經行為評分、降低腦梗死率、減輕腦組織病理損傷并抑制細胞凋亡。機制研究發現，ESWWSHW能調節血漿中與鞘脂代謝和甘油磷脂代謝相關的14種差異代謝物，并通過蛋白芯片技術篩選出18個差異表達蛋白，其中IL-10、IL-3和IL-7被識別為關鍵炎癥靶點；進一步的分子生物學驗證表明，ESWWSHW通過調控內質網應激（ERS）介導的GRP78/XBP1/CHOP信號通路，上調ATF6、XBP1、BCL2等抗凋亡因子表達，同時下調CHOP、GRP78、BAX、NLRP3等促凋亡與促炎蛋白表達，從而抑制細胞凋亡與炎癥反應，緩解腦缺血損傷。盡管研究存在一些局限性（如僅采用LC-MS分析非揮發性成分），但仍為ESWWSHW治療腦缺血提供了系統的化學與藥理學依據，并為其后續質量標準化、藥代動力學及深入機制研究奠定了基礎。

注：本文原創表明為原創編譯，非聲張版權，侵刪！

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