瑞金醫術丨這項瑞金自主研發的檢測技術大幅度提高罕見血液病的診療效率

基于阻斷置換擴增技術提高傳統Sanger測序靈敏性在檢測與輔助診斷華氏巨球蛋白血癥中的應用

第一完成人：病理科 顧怡瑾

第二完成人：病理科 王朝夫 董磊

第三完成人：病理科 李醫民

2024年冬，一位63歲的男性患者因不明原因的雙下肢持續水腫，在外院未能獲得明確診斷。瑞金醫院血液科初步檢查發現其血清中IgM異常升高，超聲提示全身多處淋巴結腫大，臨床高度懷疑為血液系統腫瘤。在進一步的病理評估中，穿刺組織先經基因檢測確認存在MYD88基因L265P突變，進一步采用阻斷置換擴增改良的Sanger測序（BDA Sanger）檢測，檢出CXCR4基因S338X低頻熱點突變。后來經數字PCR法（dPCR）驗證，該突變頻率僅為0.46%。最終，借助MYD88基因與CXCR4基因的BDA Sanger檢測結果，輔助明確了華氏巨球蛋白血癥（Waldenstr?m macroglobulinemia）的病理診斷，并且為臨床治療提供了關鍵依據。

華氏巨球蛋白血癥屬罕見病,其年發病率約為每百萬人中3-4人。許多患者在早期可能沒有任何癥狀, 只是在體檢時發現血象異常或血球蛋白增高,進一步患者會出現乏力、出血、視力模糊及手腳麻木等癥狀，均源于癌細胞在骨髓中的增殖和大量名為“IgM”的異常免疫球蛋白在血液中作祟。人體內的免疫球蛋白有多種，IgM的個頭最大，所以才有巨球蛋白的名稱。WM的診斷需要結合血常規、血免疫固定電泳、骨髓穿刺活檢以及基因檢測等多項檢查來綜合判斷，而MYD88和CXCR4基因就是WM診療過程中高度依賴的分子標志物。其中，MYD88基因L265P突變幾乎見于95%以上的WM病例，而CXCR4基因突變則更為復雜——不僅存在多個熱點（如S338X、R334X），且突變頻率常低于10%，極易被常規方法漏檢。傳統Sanger測序法雖成本低廉、操作簡便，但靈敏度通常僅限于15%–20%的變異等位基因頻率（VAF），如同在昏暗燈光下辨認細小字跡，稍有不慎便會遺漏關鍵信息。

數字PCR法或二代測序法雖靈敏度高，但要么受限于檢測試劑不普及，要么因為費用高與檢測流程復雜，難以廣泛普及。面對這一臨床痛點，瑞金醫院病理科聯合分子診斷團隊，自主設計研發了針對CXCR4基因的阻斷置換擴增（Blocker Displacement Amplification, BDA）技術，利用特異性阻斷劑“屏蔽”野生型DNA序列擴增，使突變序列在PCR過程中獲得優先放大，從而將檢測靈敏度提升至0.2% ——相當于在一萬個正常細胞中精準識別出二十個攜帶突變的“異類”。

此例患者的傳統Sanger測序CXCR4基因的檢測結果呈陰性，未能解釋患者對BTK抑制劑治療反應不佳的潛在原因。因此，瑞金醫院病理科針對這一致病基因探索性的使用了這項創新技術：BDA Sanger檢測。通過該方法，團隊成功檢出該患者的CXCR4 S338X位點是一個低頻突變，經數字PCR法驗證，低頻突變的頻率僅為0.46%。這一發現不僅補全了分子診斷拼圖，更直接指導了后續個體化治療策略的制定，成為精準病理診斷的一次生動實踐。

這項技術不僅實現了對CXCR4基因多位點突變的同步檢測，還能覆蓋插入、缺失等復雜變異類型。在方法學驗證中，其準確率達100%，對S338X和R334X的最低檢出限分別為0.2%和0.4%。與傳統Sanger平行對比，此項新技術陽性檢出率提升15.7%，顯著減少了假陰性風險。已有相當數量的標本利用該技術完成檢測，大幅提升了WM及其他相關淋巴瘤的分子分型精度，同時將單樣本檢測成本控制在合理區間，真正讓精準診斷“飛入尋常醫院”。相關核心技術已申請國家發明專利，并在2025年美國分子病理學會年會上引發國際同行關注，彰顯中國病理人在前沿診斷技術上的創新能力。

值得一提的是，這一分子病理層面的突破，正與瑞金醫院在人工智能時代的整體戰略布局深度協同。2025年，瑞金醫院正式開源了臨床級多模態病理大模型RuiPath，覆蓋包括淋巴瘤在內的19種常見癌種，構建起從宏觀組織形態到微觀基因變異的全鏈條智能輔助診斷體系。如果說BDA-Sanger技術是在“顯微鏡下捕捉基因的低語”，那么RuiPath則是在“數字森林中自動標記每一棵異常之樹”。醫生如今可在RuiPath系統中一鍵調取AI預判的病灶區域、組織學分級、脈管侵犯等數十項結構化指標，再結合高敏分子檢測結果，實現“形態+分子+臨床”的三維整合診斷。這種“AI Copilot + 精準分子工具”的雙輪驅動模式，正在重塑現代病理科的工作范式。

作為國家病理質控中心的重要成員單位，瑞金醫院病理科始終以解決臨床真實問題為導向，既深耕分子診斷的技術細節，也擁抱AI賦能的系統變革。從一個低頻CXCR4突變的精準捕獲，到百萬級數字切片訓練出的通用病理大模型，瑞金正以扎實的科研轉化能力，推動中國病理診斷從“經驗主導”邁向“數據與智能驅動”的新紀元。未來，隨著RuiPath多中心計劃的推進和更多如BDA-Sanger這樣的創新技術落地，優質病理資源將不再局限于頂尖三甲，而是通過標準化、智能化的路徑，惠及更廣泛的患者群體——這正是瑞金醫者“廣博慈愛，追求卓越”精神在數字時代的全新詮釋。

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供 稿丨病理科

編 輯丨溫兆琦