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《食品科學》:河南中醫藥大學劉延鑫副教授等:葛根素的提取方法、生物活性及生產應用研究進展

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葛根(Radix Puerariae)為豆科植物野葛(Puerariae lobatae (Willd.) Ohwi)的干燥根,其性甘、辛、涼,有解肌退熱、透疹、生津止渴、升陽止瀉、通經活絡、解酒毒之功,是傳統、常用的藥食兩用植物。葛根素又名葛根黃素,結構式見圖1,屬于異黃酮類化合物,也被稱為大豆苷元-8-C-葡糖苷(7,4’-二羥基-8-C-糖基異黃酮),是葛根的主要活性成分。現代研究表明,葛根素具有心血管系統保護、抗糖尿病、抗腫瘤、神經保護、骨保護、植物雌激素樣作用、抗炎癥、保護肝臟、改善腸道菌群等多種活性作用,在生物醫藥及食品保健及領域中得到廣泛應用。

河南中醫藥大學醫學院的黃詩涵、劉心語、劉延鑫*通過對近年來國內外有關葛根素的公開研究報道進行匯總分析,從提取方法、生物活性及在食品生產中的應用3 個方面進行系統總結,以便于未來更加科學、安全、有效地應用葛根素。


1 葛根素的提取

通過GC-MS分析(圖1),由SD法、SDE法、SFE法、SPME法和DHS法提取的箬竹揮發性成分共鑒定出84 種物質,包括醇類化合物18 種、酚類化合物2 種、酮類化合物8 種、醛類化合物17種、酸類化合物3 種、酯類化合物3 種、烯烴類化合物11 種、烷烴類化合物17 種和其他類化合物5 種,其中共有揮發性成分8 種,分別為1-己醇、3-己烯-1-醇、3,7,11,15-四甲基己烯-1-醇、6,10,14-三甲基-2-十五烷酮、β-紫羅蘭酮、肉豆蔻醛、1-二十二烯和角鯊烯。不同方法提取的揮發性成分在種類和相對含量上呈現出較大差異,其中DHS法富集效果最佳,獲得的揮發物數量最多,為41 種,其次為SDE法、SD法、SPME法和SFE法,鑒定出的揮發性成分數量分別為38、33、32 種和29 種。張亞蘭等采用頂空固相微萃取法對闊葉箬竹葉揮發性成分進行提取并分析,共鑒定出24 種香氣成分,顯著低于本實驗所用方法所獲得的香氣成分數量,這應該與SPME纖維頭的涂層差異有關。

作為具有多種生物活性的天然化合物,葛根素的提取方法日益多樣化,根據作用機理的差異,現有提取工藝主要分為物理提取法、化學提取法和生物提取法3大類(表1)。


物理提取法中,目前有超聲波提取法、亞臨界水提取法、大孔吸附樹脂法、回流提取法和微波提取法等方法。其中,超聲波提取技術通過高頻機械振動在介質中產生空化氣泡,在分子層級引發強烈的擾動效應,這種物理效應能夠破壞植物細胞壁結構,促進細胞內活性成分(如葛根黃酮類物質)的釋放。超聲波提取法具有操作流程簡便易行、提取周期顯著縮短、目標成分提取率顯著提升的優點。亞臨界水提法以水為萃取劑,被視為綠色環保、前景廣闊的變革性技術,然而,由于其需要通過控制亞臨界水的溫度與壓力,使水的極性與黏度得以在較大范圍內變動進行操作,對設備要求高,操作條件較為嚴格。作為一種特殊的高分子材料,大孔吸附樹脂具有三維網狀孔隙且不含有離子交換功能基團,因其獨特的大孔網狀結構和顯著的比表面積優勢,能夠通過非化學鍵合作用實現對水相體系中有機組分的選擇性吸附分離。其適用于大規模生產、使用周期長,然而也具有樹脂成本較高且吸附和解吸過程耗時較長的不足之處。相較于傳統浸提工藝,回流提取法通過引入冷凝回流裝置實現了溶劑的循環利用,在保持浸提法操作簡便性的同時,顯著提升了目標成分的提取率與純度,且造成污染較小、設備較為簡單、操作成本低、過程安全可控。微波萃取法通過利用極性溶劑在微波場中的介電加熱效應,能夠從多種生物基質(包括植物組織、動物樣本及礦物材料)中高效分離目標化學成分。具有省時高效、節能、易于控制、安全環保、適用范圍廣的優點,但其選擇性較差且微波不均勻時可能導致局部過熱,具有一定的風險。

化學提取法主要包括鹽析法和酸水解法。鹽析法通過向藥物溶液中引入高濃度的電解質(如硫酸銨、氯化鈉等),改變溶液的離子強度,從而降低特定生物大分子的溶解性,使其從溶液中分離析出。其操作簡單、成本低,適用于初步分離,但提取率低,僅為0.11%,且具有引入雜質的風險。基于葛根素衍生物在酸性條件下可發生水解反應轉化為葛根素的特性,對葛根異黃酮提取物進行酸性水解,再利用氯仿萃取分離即可得到葛根素,其提取純度可高達97.6%,適用于大規模生產,但酸性條件可能破壞部分活性成分,且操作復雜,設備要求高。

生物技術提取方法主要利用特定酶制劑的選擇性催化作用,通過酶解反應分解植物組織,進而實現目標活性成分的高效釋放與分離純化,其條件溫和,適用于熱敏性成分且環境友好,但也具有成本較高、反應時間長、操作復雜等缺點。

綜上所述,從提取效率看,大孔吸附樹脂法(96.37%)遠超其他方法,在提高葛根素提取效率、加強利用率方面具有顯著優勢。從時間成本看,微波法提取(2.5 min)耗時短、能耗低,但提取率仍有較大的優化空間。總體而言,大孔吸附樹脂法和超聲波提取法操作較為簡便,提取率較優良,綜合性能最佳,適合規模化生產;而亞臨界水提法、回流提取法和微波提取法則需進一步權衡其設備投入與產出效率;生物法、酸水解法和鹽析法則受限于目前提取率較低這一問題,需進一步優化。

葛根素不同提取方法的提取率差異較大,可能是由于作用機理差異大(如物理提取法對葛根素的破壞相對較小,而鹽析法對葛根素的選擇性差、酸水解法中強酸條件易破壞部分活性結構且多步分離等,導致提取率差異較大)、工藝參數匹配度不足(如微波提取法有功率不均導致局部過熱的風險,會影響提取穩定性;亞臨界水提法若設備精度不足則會顯著降低效率等)、技術適用性不高(如酸水解法需精確控制酸性條件;鹽析法和微波法選擇性差,易引入雜質或破壞目標成分等,風險因素較多,技術限制條件多)等多方面因素導致。

未來在葛根素提取技術的發展方面應注重綠色環保、高效低耗和多技術聯用,與智能化和自動化技術結合發揮協同作用,減輕單一提取工藝可能帶來的結構破壞或活性成分流失等不利影響,以期推動葛根素在醫藥、食品等領域的廣泛應用。此外,設備創新和標準化生產亦值得重視,以實現葛根素提取技術的高效、經濟和可持續發展。

2 葛根素的生物活性

2.1保護心血管系統

心血管系統作為維持機體血液循環與組織灌注的核心生理網絡,其功能完整性對人類健康具有決定性意義。因此,心血管系統保護作用研究不僅是醫學研究的優先領域,更是提升公共衛生質量和降低社會經濟負擔的戰略性投資。現有研究表明,葛根素可通過心臟保護、抗動脈粥樣硬化(AS)、降壓等發揮對心血管系統的保護作用。

2.1.1保護心臟

研究發現,葛根素通過多途徑發揮心臟保護作用,主要體現在減輕心肌細胞損傷、改善心肌缺血及再灌注損傷、抑制心肌肥厚等方面(圖2)。在減輕心肌細胞損傷方面,葛根素展現多途徑調節優勢。一方面,葛根素通過保護線粒體能量代謝減輕心肌細胞損傷。于妍等通過構建布比卡因致心肌線粒體損傷小鼠的模型顯示,穴位注射葛根素可通過調節心肌細胞線粒體內ATP合成相關蛋白核呼吸因子1(NRF1)、線粒體轉錄因子A(mtTFA)等的含量來保護線粒體能量代謝,減輕布比卡因致心肌線粒體的損傷,從而減輕心肌細胞損傷。另一方面,葛根素通過多種信號通路協同發揮抗凋亡作用。張馳等證實葛根素干預可激活Notch1/Hes1信號通路,上調B淋巴細胞瘤-2(Bcl-2)基因、抑制Bcl-2相關X蛋白(Bax)基因的表達,顯著改善心肌梗死模型小鼠的心肌細胞存活率。此外,Zhou Bin等在脂多糖誘導模型中發現,葛根素通過腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)介導的鐵凋亡信號有效抑制心臟細胞凋亡。除此之外,杜永成等揭示,葛根素通過抑制細胞外信號調節激酶(ERK)1/2-核因子-κB(NF-κB)信號通路的信號傳導,使缺氧復氧損傷心肌細胞的凋亡率從(20.32±2.08)%降至(8.12±0.65)%。葛根素還可通過緩解心肌缺血再灌注損傷從而發揮心臟保護作用。分子對接研究表明,葛根素通過與激活細胞沉默調節蛋白1(SIRT1)形成穩定復合物,進而激活SIRT1通路抑制鐵死亡進程,可顯著縮減心肌缺血再灌注損傷模型的心肌梗死面積。針對葛根素抑制病理性心肌肥厚方面,Zhao Ganjian等研究顯示,葛根素干預可激活核因子E2相關因子2(Nrf2)信號通路,使壓力超負荷模型大鼠的心肌細胞橫截面積減少,同時下調血管緊張素II誘導的新生大鼠心肌細胞肥厚相關基因的表達,從而減輕大鼠的心肌肥厚程度。機制研究表明,該作用與Nrf2介導的氧化應激調控密切相關。以上提示葛根素具有良好的心臟保護活性,其通過減輕心肌細胞損傷、改善心肌缺血及再灌注損傷、抑制心肌肥厚等方面發揮心臟保護作用,為開發心臟保護藥物或保健品提供了科學依據。


綜上,葛根素作為天然藥物在防治心肌缺血再灌注損傷、減輕心肌損傷和纖維化等疾病中具有重要開發價值,但仍面臨臨床轉化證據不足、藥代動力學特性尚未完全闡明、機制研究存在同質化傾向等問題。未來研究需進一步從開發新型給藥系統以增強靶器官蓄積、加強長期用藥安全性評估、深化機制研究等方面為葛根素心臟保護防治提供更具實際應用性的方案。

2.1.2抗AS

近年研究表明,葛根素通過多途徑協同作用發揮顯著的抗AS效應,其作用機制可系統歸納為調節脂質代謝、保護血管內皮、調控血管平滑肌、斑塊穩定與炎癥調控等方面(圖3)。在脂代謝調控層面,葛根素展現出雙重調節特性。一方面,Liu Yushi等指出,葛根素通過調節AMPKα-乙酰輔酶A羧化酶(ACC)信號通路,提高AMPKα磷酸化,明顯降低ACC1總蛋白活性,有效糾正脂質代謝紊亂。另一方面,葛根素通過miR-7、絲氨酸/蘇氨酸激酶11(STK11)和AMPK-過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)-肝X受體α(LXR-α)-ATP結合盒轉運體A1(ABCA1)級聯反應,使ABCA1介導的膽固醇外流效率顯著提升,并降低巨噬細胞內膽固醇蓄積量,顯著抑制泡沫細胞形成,穩定AS易損斑塊。此外,在治療血管內皮功能障礙方面,孫姝嬋等建立H2O2誘導的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)氧化損傷模型,發現葛根素干預可使HUVEC遷移速度降低、線粒體呼吸功能改善。機制研究表明,該成分通過改善線粒體呼吸功能,并有效減輕細胞焦亡,為內皮功能保護提供了新證據。除此之外,在血管平滑肌細胞(VSMCs)異常增殖調控方面,Wan Qiang等采用PM2.5誘導的VSMCs增殖模型揭示,葛根素聯合p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制劑可顯著降低細胞增殖抑制率,表明葛根素通過抑制p38 MAPK信號通路抑制PM2.5誘導的VSMCs增殖。針對AS易損斑塊,章平衡等發現,葛根素可能通過抑制氧化性低密度脂蛋白(oxLDL)誘導的巨噬細胞NOD樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1焦亡信號通路活化,下調炎癥細胞因子表達,穩定AS易損斑塊。網絡藥理學方法進一步揭示,葛根素可作用于內皮一氧化氮合酶(NOS)2、NOS3、血紅素加氧酶1(HMOX1)等21 個核心靶點,調控低氧誘導因子(HIF)-1、腫瘤壞死因子(TNF)、NF-κB、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)等34 條信號通路,形成多維度抗炎網絡,達到治療AS的目的。這些效果共同作用,使得葛根素在抗AS方面表現出積極的作用。葛根素具有良好的抗AS活性,能夠明顯減輕AS病變,未來可加強對葛根素抗AS作用機制的研究,進一步探究和挖掘重要的作用通路,以便發揮葛根素的抗AS作用的多樣性。

綜上,葛根素通過調節脂質代謝、保護血管內皮、調控血管平滑肌、穩定斑塊與調控炎癥等發揮抗AS作用,展現出開發新型產品的巨大潛力。目前雖已證實葛根素可從轉錄和蛋白水平治療AS,網絡藥理學亦為研究葛根素的作用靶點提供了方向,但其保護心血管系統的具體微觀機制與更多途徑仍需進一步實驗證實,如何提高葛根素的口服利用度仍有待研究。未來應進一步探討葛根素在微觀層面的作用機制,提高葛根素生物利用度,并開展相關臨床試驗以保證有效性和安全性,不斷推進葛根素在心血管系統疾病治療中的精準度。


2.1.3降血壓

近年研究顯示,葛根素在血壓調節方面展現出獨特的藥理學特性,其作用機制涵蓋炎癥調控、內皮功能改善及協同治療等多個層面(圖4)。一方面,葛根素具有直接降血壓作用。Gao Hongli等通過構建鹽誘導高血壓前期大鼠模型揭示,葛根素通過抑制下丘腦室旁核(PVN)中的活性氧(ROS)/Toll樣受體4(TLR4)/核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3(NLRP3)炎性小體信號通路活化,使動物模型平均動脈壓顯著降低。此外,郭夢婷等發現,葛根素可通過改善內皮細胞增殖遷移能力,并提高主動脈內皮舒張功能,顯著降低高脂飲食誘導的肥胖小鼠血壓。另一方面,葛根素與其他方式結合能更好發揮降壓作用。臨床研究發現,葛根湯合天麻鉤藤飲聯合硝普鈉治療高血壓危象患者,較單用硝普鈉可使平均動脈壓進一步降低。該聯合方案通過多靶點作用實現協同效應:在發揮利尿作用的同時,顯著改善血管痙攣指數,有效預防靶器官不可逆損傷。以上提示葛根素可通過抗炎作用、改善內皮功能方面起到調節血壓的作用。

綜上所述,葛根素通過抗炎、改善內皮功能等方面具有可觀的降壓潛力。然而,不同病理機制誘導高血壓模型的研究尚待深入,如長期精神緊張焦慮引起交感、副交感神經系統功能紊亂是導致高血壓的病理因素之一,作為同樣具有神經保護作用的藥物,葛根素治療高血壓伴有神經系統異常患者的優勢有待強調,此外,還存在臨床有效劑量未明確、與其他降壓藥物合用的選擇及治療效果尚待探索等問題。未來研究應進一步探索相關分子作用機制、與其他藥物的聯合治療效應等,利用其抗氧化與抗炎特性彌補現有降壓治療的不足,使葛根素成為高血壓治療中兼具療效與安全性的天然候選藥物。


2.2抗糖尿病

2.2.1降血糖

糖尿病作為一種以慢性高血糖為特征的非傳染性代謝性疾病,近年來發病率持續升高,引起社會廣泛關注。現代藥理證實,葛根素可通過保護胰島β細胞、減輕胰島素抵抗(IR)、增加葡萄糖攝取量、抑制α-葡萄糖苷酶、抗氧化應激和抗炎作用等多種途徑,發揮降糖作用(圖5)。胰島β細胞分泌的胰島素是人體內唯一的降血糖激素,可以促進細胞對葡萄糖的攝取,抑制肝臟糖異生和糖原分解。葛根素已被證實對胰島β細胞具有保護和促進其分泌的作用。研究表明,葛根素可通過增強胰高血糖素樣肽-1受體(GLP-1R)信號通路、減少ROS的產生、改善Caspase/貧血誘導因子(AIF)/Apoptsis通路、改善PI3K/Akt通路等途徑促進胰島β細胞的存活與再生、減輕胰島β細胞的凋亡、提高胰島β細胞的質量等從而降低血糖。高俊鳳等發現,葛根素可能通過調節肝臟胎球蛋白B-AMPK/ACC信號通路減輕2型糖尿病小鼠IR程度,起到降糖作用。在提高葡萄糖攝取量以降低血糖方面,一方面,在骨骼肌細胞和脂肪細胞中,葛根素可以通過增加葡萄糖轉運蛋白4型(GLUT4)轉運、激活PPAR受體表達、增強細胞內脂肪酸氧化以增強葡萄糖攝取,并改善IR,從而降低血糖。另一方面,Sun Ran等通過體內外實驗證實,葛根素可通過抑制酪氨酸蛋白磷酸酶1B(PTP1B)蛋白活性,改善胰島素信號通路并增加胰島素受體,通過顯著提高葡萄糖攝取量調節全身功能,并進一步提高葡萄糖耐量,從而達到調節血糖水平的目的。Xu Jinfang等應用磁性介孔硅的配體捕撈技術發現,葛根素對抑制α-葡萄糖苷酶活性起主要作用,從而降低將碳水化合物降解為葡萄糖的速率以達到調節血糖的目的。除此之外,陳銘等在棕櫚酸誘導的小鼠胰島素瘤6(MIN6)細胞模型中發現,葛根素干預可顯著下調p-NF-κB和Bax的表達,同時上調Bcl-2的表達,從而改善MIN6細胞的氧化應激狀態,進而抑制凋亡和炎癥反應以改善胰島細胞的功能,緩解炎癥因子對MIN6細胞的損傷。葛根素具有良好的調節血糖的活性,能夠在一定程度上改善胰島細胞的功能,為開發相關降糖藥物或保健品提供了科學依據。

綜上所述,葛根素通過多通路、多途徑表現出顯著的血糖調節作用,在開發新型降血糖藥物方面具有巨大潛力。然而,葛根素與重組甘精胰島素、二甲雙胍等目前臨床常用西藥或其他中藥進行聯合用藥時,其與相關藥物間的協同作用機制、提高療效和降低副作用的劑量選擇等方面仍需要進一步探討。因此,未來應進一步加強葛根素在調節血糖的方面的研究,深入探索其作用機制,并優化治療方案,以此為患者提供更加安全、有效的治療方案。


2.2.2減輕糖尿病并發癥

糖尿病的發生通常伴隨著大血管、微血管的變化與損害,由此引發的并發癥是患者死亡的重要原因。糖尿病并發癥發展的主要誘因為高血糖、高血脂誘導的氧化應激與炎癥。內環境的改變、細胞因子的變化是導致糖尿病各類并發癥發生的直接因素。研究顯示,葛根素對糖尿病并發癥如糖尿病腎病(DN)、糖尿病大血管病(DM)、糖尿病周圍神經病變(DPN)、糖尿病視網膜病變(DR)等可通過不同通路發揮抗氧化應激與抗炎、促進自噬、抗細胞凋亡等作用以減輕相關血管的損傷,進而顯著延緩糖尿病并發癥的發生、發展(圖6)。

葛根素可通過多種途徑對DN起到保護作用。自噬是足細胞抗衰老的主要保護機制,高血糖水平會導致足細胞損傷及自噬功能減弱,并能誘導足細胞凋亡。Xu Xiaohui等通過構建鏈脲佐菌素誘導的DN C57BL/6小鼠模型發現,葛根素可通過激活蛋白激酶RNA樣內質網激酶(PERK)/真核翻譯起始因子2α(eIF2α)/活化轉錄因子4(ATF4)信號通路,使足細胞自噬水平升高,從而防止糖尿病引起的腎損傷和DN的發展。Li Xueling等認為葛根素可通過AMPK/SIRT1通路恢復足細胞自噬活性防止足細胞損傷。此外,通過體外和體內實驗表明,葛根素刺激足細胞中SIRT1的表達,使肝激酶B1(LKB1)去乙酰化,然后磷酸化AMPK-雷帕霉素機制靶蛋白(mTOR)通路以誘導自噬。葛根素還可以增加糖尿病小鼠腎臟中環磷酸腺苷(cAMP)的產生,增強cAMP反應元件結合蛋白(CREB)磷酸化,減少CREB的過度表達,進而減少高糖誘導的糖尿病腎病小鼠足細胞凋亡。Barro等通過構建高葡萄糖損傷大鼠系膜細胞(RMCs)模型發現,葛根素可促進轉化生長因子-β(TGF-β)的表達和抑制Smad 2/3蛋白的核轉位,從而起到對RMCs的保護作用。

葛根素可通過改善相關的內皮功能障礙對DM的治療起到積極作用。高血糖可引起血管內皮的非典型炎癥反應,研究表明,葛根素可通過抑制NF-κB激活抑制炎癥反應和氧化應激,并通過改善PI3K/Akt、鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶II(CaMKII)/AMPK和蛋白激酶Cβ2(PKCβ2)/Ras相關C3肉毒毒素底物1(Rac1)通路抑制氧化應激,從而改善相關的內皮功能障礙,有利于DM的治療。此外,葛根素在DPN的治療中也展現出一定優勢。施萬細胞(SCs)是周圍神經系統最關鍵的髓鞘細胞,涂世偉等研究表明,葛根素可能通過抑制NF-κB信號通路,從而減輕高糖誘導的SCs系RSC96細胞炎癥。Xue Bing等通過體外實驗進一步指出,葛根素可能通過抑制細胞凋亡和氧化應激來保護高糖環境下的SCs免受損傷,提示葛根素對于DPN有治療作用。除此之外,葛根素對于DR有較好的療效。研究表明,葛根素通過激活Nrf2/血紅素加氧酶-1(HO-1)信號通路和抑制Nrf2/ERK信號通路降低視網膜血管內皮生長因子(VEGF)和白細胞介素-1β(IL-1β)的表達水平,或抑制信號傳導及轉錄激活蛋白3(STAT3)表達,從而減少視網膜組織的炎癥反應和抑制氧化應激,進而緩解DR病變。

綜上所述,葛根素主要通過改善相關的內皮功能障礙對于多種糖尿病并發癥具有可觀的保護作用。然而,大多數研究仍處于基礎藥理學階段,缺乏大規模的臨床試驗驗證葛根素單獨用藥治療糖尿病并發癥的有效性和安全性。此外,目前仍存在葛根素對糖尿病并發腦梗死等其他特殊類型并發癥的臨床治療效果仍待探究、作為臨床現有治療方法輔助用藥的療效尚待深入等問題。因此深入探討并發現葛根素作用新機制,并開展大樣本隨機對照研究對于糖尿病并發癥的治療有重要意義,有利于進一步豐富和發展葛根防治糖尿病并發癥的理論依據。


2.3抗腫瘤

惡性腫瘤作為全球公共衛生安全的重大威脅,其防治研究的緊迫性日益凸顯。國際癌癥研究機構(IARC)最新統計數據顯示,2020年全球新發癌癥病例達1 930萬 例,癌癥相關死亡近1 000萬 例,預計至2040年新發病例將增長47%,因此,探索高效、低毒且副作用小的天然抗腫瘤藥物顯得尤為重要。

研究表明,葛根素因其具有很好的凋亡誘導作用,是一種很好的治療不同癌癥的藥物。葛根素可以通過誘導細胞調亡、調節細胞周期、影響線粒體的代謝、抑制腫瘤細胞遷移、誘導腫瘤細胞凋亡和自噬等途徑起到抗腫瘤效果(圖7)。盛格格等對葛根素的抗膠質瘤活性進行研究,結果表明葛根素處理膠質瘤細胞后,會降低線粒體膜電位和ATP含量,并下調泛素C(UBC)通路蛋白表達水平,起到抑制其增殖和遷移并促進其凋亡的效果。李濤等則進一步探討了葛根素的抗非小細胞肺癌活性,發現葛根素可明顯抑制非小細胞肺癌A549細胞中基質金屬蛋白酶(MMP)-2蛋白、MMP-9蛋白表達和降低p-p65/p65的比值,通過NF-κB信號通路抑制肺癌A549細胞增殖、侵襲和遷移能力,從而起到抗腫瘤的效果。除此之外,體內體外實驗研究顯示,葛根素可抑制Akt/mTOR的信號傳導來抑制葡萄糖的攝取和代謝,進而誘導胰腺癌細胞(PCCs)凋亡、抑制PCCs遷移和侵襲,以減少胰腺導管腺癌細胞的生長和轉移。以上提示葛根素可通過多種信號通路誘導腫瘤細胞凋亡,未來可針對其他多種類型的腫瘤進行研究,以便發掘葛根素抗腫瘤的廣譜性,探究葛根素抗腫瘤的共同作用通路或作用機制。

綜上,葛根素作為良好的細胞凋亡誘導劑,具有潛在的抗癌活性。然而目前葛根素對于各種類型癌癥治療的相關通路或基因水平作用尚未明確,具體有效劑量和安全性未能保證。此外,關于葛根素對癌細胞骨轉移、淋巴轉移等是否有抑制作用,是否足以支持其成為可行的治療藥物等問題仍需進一步實驗研究及臨床印證。未來應進一步深化有關以上內容的研究,以期為腫瘤患者提供更為全面、安全、有效的治療方案。


2.4保護神經

隨著人口老齡化加劇,阿爾茨海默病(AD)等神經退行性疾病和焦慮障礙、抑郁癥等精神類疾病的患病率均顯著增加。此類疾病普遍存在診斷復雜、治療成本高、康復周期長等挑戰。研究表明,葛根素有一定的神經保護作用,可作為治療或輔助治療某些神經系統疾病的有效天然成分(圖8)。

2008年以來,葛根素在AD及相關神經系統疾病治療中的作用逐漸被證實,其機制涉及神經保護、抗炎、改善認知功能及調節神經可塑性等多方面。一方面,葛根素通過減少β-淀粉樣蛋白(Aβ)沉積及降低腦組織Aβ水平治療AD,郭珂一等利用AD模型果蠅實驗證實,葛根素可改善果蠅爬行能力并延長其壽命,具有顯著的神經保護作用。葛根素對血管性癡呆亦具治療潛力,任宏偉等發現,葛根素通過降低細胞內Ca2+濃度及上調腦源性神經生長因子(BDNF)表達保護海馬神經細胞。Liu Song等證實葛根素可通過增加突觸密度、緩解鈣超載、調控cAMP反應元件結合蛋白信號通路等改善認知功能損傷。湯熠等進一步指出,葛根素的作用機制可能與Akt表達上調及高遷移率族蛋白B1(HMGB1)、轉移抑制因子(MIF)、TNF-α蛋白表達抑制有關。分子對接研究還表明,葛根素作為硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)抑制劑,可能通過抑制NLRP3活化發揮抗神經炎性效應。以上提示未來研究可進一步探索葛根素的分子靶點、信號通路調控細節及其與其他藥物的協同作用,以優化其臨床應用并拓展治療范圍。

葛根素在多種軀體疾病共病抑郁的治療中亦發揮著重要作用。胡子奇等指出,葛根素可能通過激活胰島β細胞胰高血糖素樣肽-1受體(GLP-1R)/Wnt/mTOR信號通路,增強海馬神經可塑性,以改善高脂誘導糖尿病小鼠的抑郁癥狀。招志輝等進一步指出,葛根素可能通過調控kappa B抑制因子激酶(IKK)/人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)/NF-κB通路改善創傷后應激障礙大鼠的焦慮程度,并增強自主運動和學習能力,還可降低大腦單胺類遞質和炎癥因子水平。此外,葛根素發揮抗創傷后應激性障礙功能可能還與促進大鼠腦部轉位因子蛋白(TSPO)表達、升高四氫孕酮含量、提高γ-氨基丁酸A型受體(GABAA)抑制性突觸后電流(IPSC)幅度與頻率相關。以上提示葛根素可通過多種信號通路改善糖尿病共病抑郁及創傷后應激障礙等軀體疾病相關精神癥狀,未來研究可進一步探索葛根素在不同疾病模型中的作用機制,開展高質量的臨床試驗,以期為治療提供新的科學依據。

綜上所述,作為天然活性成分,葛根素在神經系統疾病治療中的作用較為廣泛,然而其具體分子機制尚不明晰,如現已證明葛根素可通過上調BDNF保護大鼠海馬神經細胞,但影響BDNF的機制尚不清楚;葛根素可減輕大鼠海馬神經細胞內Ca2+超載,但是尚不能使其降至正常水平。值得注意的是,GLP-1R/Wnt通路也有調控機體糖代謝的作用,葛根素是否在治療糖尿病合并抑郁此類并發癥方面具有獨特優勢,后續可深入研究予以證實。此外,葛根素的治療作用是否有其他信號通路調控機制及其在臨床中應用的有效性及安全性尚不明確。未來可進一步探索葛根素在神經炎癥、突觸可塑性及神經再生中的作用機制,驗證其在神經系統疾病治療中的療效、安全性及最佳劑量。同時,可探索葛根素與其他藥物或神經調控技術的聯合應用,深入解析其作用網絡及在復雜神經系統疾病中的應用潛力。


2.5保護骨系統

2.5.1防治骨質疏松

骨質疏松癥是一種多因素的全身性骨代謝疾病,在我國患病率較高,嚴重威脅公共尤其是老年人的健康。研究表明,葛根素可調控成骨-破骨細胞動態平衡,在防治骨質疏松癥中發揮作用。

現有研究證明葛根素可通過抗氧化作用保護骨細胞,其可激活Nrf2信號通路,上調血紅素氧合酶1(HO1)、醌氧化還原酶1(NQO1)蛋白表達,降低丙二醛(MDA)水平并提高谷胱甘肽(GSH)水平,減輕氧化損傷。葛根素還可抑制破骨細胞分化進行骨保護,劉春麗等表明,葛根素可抑制Notch信號通路,減少RAW264.7細胞向破骨細胞分化,并降低破骨細胞標志物(如酒石酸酸性磷酸酶、組織蛋白酶K、轉錄因子C-fos mRNA)表達。同時,目前研究證實葛根素可通過調節成骨細胞分化和骨代謝發揮一定的骨保護作用。通過抑制PPARγ/Axis抑制蛋白2(Axin2)并激活Wnt信號通路,葛根素可改善去卵巢大鼠骨代謝水平,優化骨密度及骨形態學結構,此外,實驗還表明葛根素可介導磷酸酯酶與張力蛋白同源物(PTEN)-PI3K-Akt信號通路,上調PTEN、轉錄因子Forkhead box蛋白O1(FoxO1)和過氧化氫酶(catalase)基因表達,抑制絕經后骨質疏松癥。于冬冬等指出,葛根素可增強成骨細胞自噬能力,表現為自噬小體數量增加及自噬特異性蛋白微管相關蛋白輕鏈3-II型(LC3-II)和自噬基因BECLIN 1蛋白表達上調,并通過激活p38 MAPK信號通路促進小鼠胚胎成骨細胞前體細胞的增殖和分化。

綜上所述,葛根素通過不同信號通路發揮抗氧化、抑制破骨細胞分化及調節成骨細胞分化和骨代謝等作用,為骨質疏松癥的防治提供助力(圖9)。但葛根素對不同證型的促表達程度存在差異,后續實驗可進一步驗證是否由各階段成骨因子的表達波動所致。此外,針對絕經后骨質疏松亦可研究其是否與葛根素的雌激素樣作用有關。以上提示未來研究可進一步探索葛根素在不同骨疾病模型中的作用機制,優化其靶向治療策略,探索葛根素發揮作用的更多途徑及在臨床中的應用潛力,開發相關藥物或功能性食品,為骨質疏松癥的防治提供新思路。


2.5.2抗股骨頭壞死

股骨頭缺血性壞死(ONFH)是一種因股骨頭血液供應障礙導致的病理改變,其特征性表現為骨髓組織壞死、骨細胞凋亡以及繼發性骨組織結構破壞,臨床主要表現為進行性加重的髖部疼痛和關節活動受限。從中醫辨證論治的角度來看,激素誘導型股骨頭壞死可歸屬于“骨痹”“骨蝕”等范疇,其病因病機可概括為:腎虛骨骼失養,痰蘊血瘀。

近年來,中藥在激素性股骨頭壞死治療中的應用日益廣泛,葛根素作為重要活性成分展現出修復與保護潛力(圖10)。研究表明,葛根素可通過激活自噬相關信號通路發揮治療作用。賈巖波等推測,葛根素通過AMPK-mTOR-Unc-51樣激酶1(ULK1)信號通路重新激活血管內皮細胞(VEC)自噬,逆轉激素對VEC自噬的抑制,延緩或修復股骨頭缺血壞死。藥理學研究進一步證實,葛根素可通過調節AMPK/mTOR/ULK1信號通路,上調自噬相關蛋白AMPK、ULK1、mTOR的表達,以修復激素性股骨頭壞死。此外,葛根素通過上調微小RNA-30b-5p(miR-30b-5p)表達抑制氧化應激及細胞凋亡,且作用呈劑量依賴性。Zhao Yuxuan等利用四面體骨架核酸搭載葛根素,提高了其水溶性和生物利用度,證實葛根素通過激活Akt/Bcl-2信號通路減弱大劑量塞米松誘導的骨髓間充質干細胞凋亡和成骨功能障礙。

綜上所述,葛根素通過調節信號通路以激活自噬等機制在激素性股骨頭壞死治療中的作用日益凸顯,但葛根素干預的最佳劑量、療程以及葛根素是否還通過其他的信號通路調控自噬等問題仍需要進一步探討。提示未來可進一步優化葛根素的干預劑量以提高其生物利用度,并深入探索其在其他骨壞死模型如激素性模型、酒精性模型等中的作用機制及臨床轉化途徑,為股骨頭壞死的治療提供更多可能性。


2.6植物雌激素樣作用

2.6.1抗乳腺癌

近年研究表明,葛根素通過多途徑對乳腺癌具有潛在治療作用,主要體現在抑制癌細胞增殖、調控細胞周期及誘導凋亡等方面(圖11)。一方面,葛根素通過調控細胞周期抑制乳腺癌細胞增殖。包啟年等發現,葛根素可通過阻滯細胞周期S期向G2/M期轉換,減緩周期進程,抑制細胞分裂并誘導凋亡,抑制乳腺癌的發展。張清琴等進一步證實,葛根素以濃度依賴性方式抑制乳腺癌細胞增殖,其最大抑制效應出現在濃度1 μmol/L,且與細胞周期調控密切相關。葛根素還可通過調控細胞內信號傳導機制發揮抗腫瘤作用,包括負調控細胞增殖及通過激活酪氨酸蛋白激酶(PTK)表達降低線粒體功能,抑制癌細胞增殖、侵襲并誘導其凋亡。

綜上所述,葛根素可通過調控細胞周期和信號通路抑制乳腺癌細胞增殖并誘導其凋亡,然而其具體作用機制、劑量-效應關系及安全性仍需深入研究,特別是不同濃度下的生物學效應及其對正常細胞的影響尚未明確。以上提示未來研究應聚焦于葛根素的作用靶點、臨床轉化潛力及安全性評估,探索葛根素與其他抗癌藥物的協同作用,優化其劑量和給藥方式,為乳腺癌治療提供新的理論依據和治療策略。


2.6.2促進泌乳

葛根提取物在泌乳性能調控中的作用逐漸被驗證,不同動物模型的相關研究均有進展(圖12)。研究表明,葛根提取物可顯著提升奶牛泌乳性能,添加12.5、125、250 mg/kg葛根提取物60 d后,荷斯坦奶牛的日產奶量、乳脂率和乳密度均顯著提高,提示其可通過改善代謝狀態優化泌乳性能。在母豬身上,葛根異黃酮亦表現出顯著的促泌乳作用,添加0.25%葛根異黃酮21 d后,長白母豬泌乳相關激素分泌顯著增強,但其對母豬的血清生化指標無顯著影響,具體機制尚待闡明。此外,葛根素對小鼠泌乳性能的影響呈現劑量依賴性,低劑量(18 mg/kg)可促進泌乳,表現為血清催乳素(PRL)含量及乳腺組織催乳素受體(PRLR)蛋白表達增加,而高劑量(72 mg/kg)可能因PRL濃度過高抑制PRLR/Janus激酶2(JAK2)信號傳導及轉錄激活蛋白5(STAT5)通路表達,導致促泌乳作用減弱。值得注意的是,盡管葛根素并未使哺乳期小鼠主要器官產生明顯病理學改變,但其對子代小鼠的長期影響仍需深入研究。

綜上所述,葛根素可通過優化代謝狀態、調節內分泌等途徑促進泌乳,其機制與劑量效應呈現物種差異性。但其具體機制仍然尚未明確,這提示未來可進一步闡明葛根素在不同動物模型中的具體作用機制,嚴格遵循物種特異性劑量標準,評估其對子代動物的遠期影響,探討劑量-效應關系及長期安全性,并不斷探索其在畜牧業中促進泌乳的最佳添加劑量。


2.7調節腸道菌群

腸道菌群是定植于腸道的微生物群落,通過代謝產物協助宿主完成多種生理功能。正常情況下菌群處于動態平衡狀態,致病菌或外源性物質可能打破這種平衡,引發腸道及全身性疾病。研究表明,腸道菌群及其代謝產物失衡不僅影響腸道穩態,還與消化系統疾病、代謝綜合征、骨代謝異常等多種疾病的發生發展密切相關。

近年研究表明,葛根素通過調節腸道菌群對多系統疾病具有顯著干預作用,其機制涉及微生物群落重構、代謝產物調控及炎癥通路抑制等多個層面(圖13)。在心血管疾病領域,葛根素一方面可靶向降低AS模型小鼠腸道普雷沃氏菌豐度,抑制三甲胺(TMA)合成,使血漿三甲胺N-氧化物(TMAO)水平顯著下降,有效抑制AS斑塊形成。另一方面,葛根素可通過修復腸黏膜屏障、提升Lactobacilli等有益菌豐度,調節腸道微生物群穩態,顯著改善心肌纖維化。在代謝性疾病方面,王馨通過構建2型糖尿病小鼠模型證實,葛根素可通過調控3-羥基鄰氨基苯甲酸3,4-雙加氧酶(Haao)、固醇調節元件結合蛋白1(Srebf1)等腸道基因的表達量,調節腸道菌群的物種組成與豐度,影響代謝物的含量,促進糖脂代謝,使得小鼠胰島素敏感性提高,從而改善小鼠的2型糖尿病。針對骨代謝異常,Li Bo等通過構建卵巢切除大鼠模型發現,葛根素可通過改善腸道菌群紊亂,使其代謝產物短鏈脂肪酸(SCFAs)水平升高,同時修復腸黏膜完整性以改善骨微環境,達到抗骨質疏松作用。此外,在神經系統疾病方面,葛根素對神經系統疾病的作用機制涉及“微生物-腸-腦軸”調控,其通過調節腸道菌群失調,抑制海馬、血清、結腸的炎癥反應,下調TLR4/NF-κB通路表達,發揮其抗抑郁作用。除此之外,在消化系統疾病的治療中,葛根素可降低普雷沃氏菌等致病菌水平,促進S24-7等抗炎菌增殖,提高腸道微生物多樣性,從而調節結腸炎小鼠微生物生態平衡,顯著緩解結腸炎癥狀。以上提示葛根素可通過調控腸道菌群發揮治療心血管疾病、代謝紊亂、骨代謝異常、神經系統疾病及消化系統疾病等作用,為未來腸道菌群調節與多種疾病治療之間關系的進一步研究提供了重要依據。

綜上,葛根素通過多靶點調控腸道菌群生態平衡,在治療多種疾病領域展現出獨特治療價值。該發現不僅為闡釋“腸-X軸”交互作用機制提供了新視角,更為開發基于菌群調控的廣譜治療策略奠定了理論基礎。然而,葛根素的劑量和使用方式可能導致其調節腸道菌群的內在機制存在差異,其安全性和有效性的評估仍待深入,并且,腸道菌群對于不同疾病究竟是有益菌還是有害菌依然存在爭議。因此,未來需結合宏基因組學、轉錄組學、蛋白質組學和代謝組學等先進技術進行大樣本的前瞻性研究,以進一步揭示葛根素-腸道菌群相互作用的具體分子機制,并探索其在臨床轉化中的應用潛力。


3 在食品生產中的應用

3.1淀粉類食品

淀粉是人體能量的主要來源之一,聯合國糧食及農業組織預言:粉葛將在21世紀成為人類第六大主食。近年來,葛根獨特的營養價值和功能性成分使其在食品加工中受到關注。

葛根在面條制作中的應用有所增多。熊焰等指出,葛粉與面粉的比例以及六偏磷酸鈉的添加量對葛根面條的感官品質具有顯著影響,當葛粉與面粉的比例為3∶7時,添加原料粉質量50%的含1%六偏磷酸鈉與5%氯化鈉的溶液和面并熟化20 min,可制備出質感優良的葛根面條。簡夢嬌等進一步指出,當葛根全粉添加量為20%時,面條在彈性和咀嚼性上表現最佳,同時具有較好的葛根風味,能夠滿足口感良好、營養豐富及品質穩定的要求。除面條以外,葛根在饅頭制作中的應用也更加廣泛。莫茹茵指出,在饅頭的制作中加入14.3%葛根粉,可顯著提高饅頭中氨基酸、膳食纖維、異黃酮和鈣的含量,提升其營養價值。梁姣姣等通過添加正山小種紅茶粉和葛根粉研制出紅茶葛根粉饅頭,其中葛根粉的最適添加量為35 g,成品風味獨特、營養全面,具有較高的市場潛力。此外,葛根在代餐食品中的應用也取得了創新性進展。符家忍以葛根粉為主要原料,搭配紅棗、脫脂奶粉及木糖醇等輔料,通過膨化、真空干燥及超微粉碎等現代加工技術研制出一款適宜年輕女性享用的新型功能性代餐產品,該產品不僅滿足了現代消費者對健康食品的需求,還為葛根的高附加值利用提供了新思路。

綜上所述,葛根在面條、饅頭及代餐食品等淀粉類食品中的應用日益廣泛,其獨特的營養價值和功能性成分為食品加工提供了廣闊的發展空間。然而當前相關研究仍多停留在實驗室階段,在實際生產中的應用尚顯不足。未來應注重葛根素生物活性的深入研究,拓展其在食品保健領域的應用范圍,進一步優化加工工藝,開發更多滿足消費者需求的健康食品。

3.2發酵類食品

發酵食品是人們利用有益微生物加工制造的一類食品,具有一定的營養價值和獨特的風味。葛根作為一種功能性原料,不僅能夠提升食品的風味,還能增強食品的保健功效。

目前,葛根素已在酸奶、醋和酒等發酵類食品的生產中發揮作用。賴盈盈等將葛根液與全脂奶粉與白砂糖混合加工后得到葛根酸奶,其組織細膩口感佳,且清除羥自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的能力高于自制原味酸奶,表明葛根酸奶不僅具有良好的感官品質,還具有較強的抗氧化活性。以葛根為原料釀醋,能增強食醋的保健功效,趙紅年等利用葛根高粱復合釀造山西老陳醋,發現葛根占高粱質量比為30%時,制得山西老陳醋中葛根素質量濃度可達75.5 mg/dL,不僅豐富了陳醋的功能性成分,還顯著提升了其保健功效,為傳統食醋的升級提供了新思路。董琪等以野葛全粉和野葛淀粉為原料,通過濃醪發酵技術制備葛根酒,然而研究認為,野葛中的纖維素成分在一定程度上會阻礙葛根酒乙醇濃度和總黃酮含量的提升,未來可對去除或轉化纖維素進行進一步研究,以提高其品質和功能性成分含量。

綜上所述,葛根素為多種發酵類食品的生產注入新的活力,未來研究可進一步優化葛根在發酵食品中的加工工藝并進行推廣,拓展葛根素在功能性食品中的應用潛力以滿足消費者對健康食品的需求。

結 論

葛根素是葛根中的主要有效成分,其資源豐富,毒性小,藥理作用廣泛,應用前景廣闊。本文綜述了葛根素在提取方法、生產應用以及其在保護心血管系統、調節血糖、抗腫瘤、神經保護、保護骨系統、植物雌激素樣作用以及調節腸道菌群等方面的生物活性。鑒于當前研究中的不足與挑戰,本文提出以下展望,旨在為葛根素的深入探索與高效利用提供可行性參考依據。1)開發新型遞藥系統:葛根素的口服生物利用度低、水溶性差等問題限制了其臨床應用,盡管納米遞送系統或結構修飾等策略已被提出,但高效、安全的制劑技術仍有待突破。未來應開發新型遞藥系統以提高葛根素的生物利用度,且實現靶向遞送。2)明確分子作用機制:葛根素的具體分子作用機制尚未完全闡明,例如其對多條信號通路的調控存在靶點模糊性。未來應持續推進相關研究,深挖具體分子作用機制,并系統探索與其他藥物的協同或拮抗效應,拓展其在復雜疾病如AD、腫瘤輔助治療中的應用潛力。3)拓展食品應用健康效益:葛根素已在細胞和動物模型中顯示出潛在的健康益處,但作為食品成分的應用研究相對較少。未來可深化腸道菌群-葛根素代謝物相互作用機制研究,為益生元等功能食品開發提供依據。4)加強食物配方協同效應研發:現有研究表明,葛根素與其他食品成分聯合使用可能具有協同效應,但具體機制尚不清楚。未來的研究應聚焦于葛根素與其他食品成分的相互作用,闡明其在食品配方中的協同效應及其對健康益處的增強機制,以期為開發新型功能性食品提供策略和思路,提升產品的健康價值。

綜上所述,葛根素的深入開發與應用需克服制劑技術有待突破、機制研究匱乏、應用領域狹窄等難題。未來應進一步開發新型遞藥技術、深化分子作用機制、加強臨床轉化力度及探索聯合用藥策略,通過跨學科合作與技術創新,葛根素有望從傳統中藥活性成分向現代化精準藥物轉化,為人類健康提供更優解決方案。

作者簡介

通信作者:

劉延鑫 副教授

河南中醫藥大學醫學院

博士,碩士生導師,研究方向為中藥抗感染性疾病免疫及機制研究,主持河南省中醫院管理局課題2 項,教育廳重點科研項目2 項,獲河南省科學技術三等獎1 項,鄭州市科學技術進步二等獎1 項,第一作者或通信作者發表SCI論文3 篇,中文核心期刊論文20余篇,副主編國家十三五規劃教材2 部,參編教材3 部,副主編著作3 部。

第一作者:

黃詩涵 碩士研究生

河南中醫藥大學醫學院

黃詩涵(2004- ),女,就讀于河南中醫藥大學,研究方向為藥食同源產品開發與應用。

引文格式:

黃詩涵, 劉心語, 劉延鑫, 等. 葛根素的提取方法、生物活性及生產應用研究進展[J]. 食品科學, 2025, 46(17): 398-411.DOI:10.7506/spkx1002-6630-20250305-034.

HUANG Shihan, LIU Xinyu, LIU Yanxin, et al. Recent advances in extraction methods, biological activities and application in foods of puerarin[J]. Food Science, 2025, 46(17): 398-411. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20250305-034.

實習編輯:申婧婧;責任編輯:張睿梅。點擊下方閱讀原文即可查看全文。圖片來源于文章原文及攝圖網



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