GLP機構非臨床研究方案撰寫要求一覽

一、研究標題（Study Title）

1.法規要求

21 CFR Part 58僅要求標題“具有描述性”（descriptive），但未給出具體標準，表述較為模糊。

2.行業最佳實踐

為便于識別、歸檔和監管審評，建議采用標準化格式的標題，包含以下關鍵信息：

3.示例

RXXXX:A 28-day oral gavage toxicity study of Compound XYZ in Sprague-Dawley Rats with a14-day recovery period.
（RXXXX：化合物XYZ在Sprague-Dawley大鼠中經口灌胃給藥28天毒性研究，含14天恢復期。）

4.編號管理說明

CRO（合同研究組織）通常根據其主計劃表（Master Schedule）分配純數字型唯一研究編號。申辦方（Sponsor）常另設一套內部研究編號，用于自身數據管理和申報文件組織，可能與CRO編號不同。

標準化標題有助于監管人員快速把握研究設計、階段及用途，提升審評效率。

二、研究目的（Purpose of the Study）

1.定位與作用

是對研究核心目標的簡明陳述，屬于方案中的基本要素；可與標題內容高度重合，但應更完整、更具描述性。

2.撰寫建議

應清晰說明：研究終點（如毒性、毒代動力學）；動物性別與種屬；給藥方案（途徑、周期）；是否包含恢復期評估。

3.示例

“To determine the toxicity and toxicokinetics of Compound X in male and female rats when administered by oral gavage for 28 days, and to evaluate recovery from any potential toxic effects.”
（旨在評估化合物X經口灌胃給藥28天后在雄性和雌性大鼠中的毒性及毒代動力學特征，并考察潛在毒性效應的可逆性。）

三、受試物與對照物的識別（Identification of Test and Control Articles）

1. 基本識別信息

必須提供：名稱、化學文摘號（CAS No.）或內部代碼編號；

通常情況：受試物名稱多為企業內部化合物代號（如“Compound XYZ”）。

2. 推薦補充信息（雖非強制，但強烈建議）

目的：確保不同研究間數據可比性，支持科學解讀與監管評估。

3.對照物與參比物（Reference Article）

OECD GLP明確要求識別參比物質（Reference Item，即對照物質）；

FDA GLP（21 CFR Part 58）未明確定義“參比物”，但實踐中通常包含陽性/陰性對照或溶媒對照，并需明確標識。

4.儲存條件與留樣要求

儲存條件

方案中應明確受試物、對照物及留樣（reserve samples）的儲存要求，包括：溫度范圍、濕度控制、避光要求等。

留樣（Reserve Samples）

定義：指研究中所用每一批次受試物的代表性樣品；

法規依據：21 CFR 211.170（雖屬cGMP條款，但常被參考用于GLP研究）規定：1）留樣量：至少為完成全部質量檢測所需量的兩倍（不包括無菌和熱原檢測）；2）保存期限：需在試驗機構保存至研究結束后規定時間（通常覆蓋整個研究周期及必要復測窗口）。

5.關于批次號（Lot/Batch Number）的最佳實踐

是否強制？否，非GLP法規硬性要求。

不過，推薦做法是在方案中注明所用受試物的生產批次號。若研究中途更換批次，需通過方案修訂（amendment）記錄。

新舊批次使用日期需明確標注，便于：1）分析治療期間出現的毒性是否與批次相關；2）評估批次特異性雜質的影響；3）雖然批次信息通常記錄在原始數據或最終報告中，但寫入方案更便于快速查閱。

6.GMP生產的API能否用于GLP研究？

1）法規立場

GLP研究不要求使用GMP物料。

但允許使用GMP生產的API，前提是：在GLP研究報告中聲明此為“GLP例外”（GLP exception），因GMP與GLP在質量體系上存在差異。提供完整的質量分析證書（Certificate of Analysis, CoA）。

2）FDA接受情況

FDA已接受使用以下物料開展的非臨床研究：1）GMP生產的API（常見于為I期臨床制備的原料）；2）非GMP/非GLP的工程批次（engineering batches），前提是：API表征充分；CoA包含覆蓋整個給藥周期的有效期或復驗期；生產商具備可靠、可重現的生產工藝記錄。

3）風險提示

使用未充分表征的非GLP API存在監管拒收風險。若API純度、雜質譜或穩定性不明，可能導致非臨床數據不被認可，影響后續臨床或注冊進程。

四、非臨床研究方案中“申辦方”與“試驗機構”信息的填寫要求

1.基本內容（FDA要求）

方案中需明確：申辦方（Sponsor）；開展研究的試驗機構名稱和地址（Testing Facility）。此項要求相對直接，但實際操作中需注意細節，尤其在多地點或跨國研究中。

2.OECD GLP的更詳細規定

OECD GLP對相關信息提出了更全面的要求，包括：

根據OECD定義：

“試驗機構”=研究負責人（SD）所在地點；

“試驗點”=PI所在的其他執行地點。

3.行業實踐與監管考量

盡管FDA法規未強制要求提供所有地址和人員信息，但目前全球申報實踐中，方案普遍包含：申辦方、試驗機構、各試驗點、研究負責人、主要研究者的姓名、地址及聯系方式。這已成為國際監管申報的標準格式。

4.地址信息的重要性

許多CRO擁有多個分支機構或實驗室。

明確標注具體開展研究的地點地址至關重要，原因包括：1）若該地點曾被FDA發出483缺陷通知或存在合規問題，監管機構可快速核查；2）在FDA審計或質疑研究數據完整性時，能準確定位責任單位；3）有助于確保審計追蹤（audit trail）的準確性和透明度。

五、非臨床試驗系統（數量、體重、性別、來源、種屬、品系/亞系、年齡等）

1.測試系統的關鍵特征及其科學意義

在非臨床毒理學研究中，必須在方案中明確以下試驗系統特征（通常為實驗動物）：

所有這些變量均可能影響受試物的藥代動力學、毒代動力學及毒性表現，是跨研究數據比較和風險評估的基礎。

2.各要素的具體要求與最佳實踐

1）動物數量（Group Size）

如一般亞慢性毒性研究（如28天、90天），嚙齒類通常每組每性別10–12只（行業標準，雖非法規強制）。當然，國內數量要求更多一些，一般不少于15只/性別。

生殖毒性研究（如胚胎-胎仔發育）要求16–20只孕鼠（ICH Draft Guideline, 2017）；致癌性研究通常需要更大樣本量以確保統計效力。

目標是在倫理（3R原則）與科學可靠性之間取得平衡。另外，國內外對動物數量要求可能與此不一致，可參考具體指導原則。

2）體重范圍

設定合理范圍：減少個體變異性；識別并剔除健康狀況不佳的“離群值”動物；作為隨機分組依據，避免組間基線偏差。

3）性別選擇

常規毒理研究：必須同時使用雄性和雌性動物；

例外情況：生殖毒性研究（如僅用孕雌性）；安全藥理學研究（若已知無性別差異）。

性別差異的典型案例（嚙齒類）：雄性大鼠細胞色素P450酶水平更高→藥物清除更快，可能導致系統暴露量（AUC）降低。需采用不同劑量，使兩性暴露相當。

4）動物來源（Supplier）

應記錄供應商名稱及設施地址；

原因：某些供應商可能存在隱性感染（如病毒、寄生蟲），影響藥物反應；遺傳漂變（Genetic drift）可能導致背景病理發生率變化，生殖指標波動。

優質供應商通常提供歷史繁殖與健康數據，有助于數據解讀與跨研究比對。

5）種屬與品系

種屬差異：極為常見（如犬對某些心臟毒性更敏感，猴更接近人）；

品系差異：較少但存在，例如：Brown Norway大鼠對藥物誘導的皮膚藥疹高度敏感。

選擇應基于科學合理性與監管接受度。

6）年齡要求

比如一般毒理學研究，使用性成熟青年動物為默認標準，如大鼠8-10周齡，犬5-7個月（國內要求6-12月）。而慢性/致癌性研究，則需確保足夠動物存活至研究結束，選擇更年幼動物，如大鼠5-6周齡。當然，幼齡動物研究，則要根據目標患者年齡、靶器官毒性及給藥窗口確定。

如果使用未成熟動物，需謹慎評估其對發育中器官系統（如生殖、神經、免疫）的影響。

3.試驗系統的識別

1）個體識別的重要性

在非臨床毒理學研究中，對每只實驗動物進行準確識別至關重要，原因包括：確保正確動物接受正確劑量；保證各項操作（如采樣、觀察、解剖）；避免數據混淆，保障數據完整性與可追溯性。

2）常用識別方法

主要識別方式（推薦用于GLP研究）為植入式微型芯片（Microchip）：通過計算機連接的掃描儀讀取唯一編號；可自動記錄并追蹤動物接受的各項操作；是當前GLP毒理實驗室的主流做法。

輔助/備用識別方式：皮膚紋身（Tattoo）、耳標、永久性記號筆標記

這些手動方法通常作為微芯片失效時的備份手段，確保即使技術故障也能維持個體識別。

3）群養vs.單籠飼養對識別的影響

特別注意：某些個體（尤其是雄性小鼠）具有較強攻擊性，易與籠伴打斗。此類動物需臨時或永久單籠飼養，并在方案或原始記錄中說明原因。

六、試驗設計描述及偏倚控制方法

1.試驗設計描述

試驗設計應在研究方案中清晰說明，通常以表格形式呈現，包含以下關鍵要素：研究分組（Study Groups），明確各組設置（如對照組、低/中/高劑量組）；每組動物數量及性別分布，如“10只雄性+10只雌性/組”；劑量水平（Dose Levels），以mg/kg或其他合適單位表示；給藥體積與濃度，確保給藥一致性（如5mL/kg，10mg/mL）；衛星組（Satellite Groups），包括用于毒代動力學（TK）或恢復期觀察的額外動物；對照組類型，標注陰性對照（如溶媒對照）、陽性對照（如已知毒性化合物）。此類表格有助于審評人員快速理解整體研究架構和劑量-反應關系設計。如下表所示。

其它如給藥途徑（對于靜脈輸注（IV infusion）研究，需注明輸注速率（如 mg/kg/h）、輸注持續時間（如 30 分鐘、24 小時））、給藥頻率和周期也應在方案中注明。此外，方案中還應注明給藥途徑（如與臨床擬用途徑一致）、給藥劑量選擇的理由。

2.偏倚控制方法（Control of Bias）

為確保數據客觀性和科學可靠性，需在關鍵環節采取系統性措施減少偏倚：

1）動物隨機分組（Randomization）

嚙齒類動物（大鼠、小鼠等）：采用計算機生成的隨機分配程序；優先使用能平衡各組體重分布的算法（如區組隨機化），避免因體重差異引入混雜因素。

大型動物（犬、非人靈長類、小型豬等）：隨機化前進行給藥前篩選，包括臨床病理學檢查（血液學、生化等）；心電圖（ECG）評估。

排除標準：存在明顯異常指標的個體；無法適應群養（如攻擊性強）的動物。

2）解剖順序隨機化

在剖檢階段，按劑量組隨機或交錯順序進行操作，目的是避免技術人員因知曉劑量信息而無意識產生觀察或記錄偏差（如對高劑量組更仔細檢查）。

七、非臨床GLP研究中飼料、飲水及溶媒/助懸劑等輔料的描述要求與質量控制規范

1.飼料、溶媒及其他輔料的描述要求

根據GLP法規（如21CFRPart58），研究方案中必須明確說明以下內容：

1）飼料信息

種類與來源：需注明所用飼料的名稱、供應商及是否為標準實驗動物飼料；

污染物控制要求：必須提供飼料中可合理預期存在的污染物（如重金屬、農藥殘留、霉菌毒素、植物雌激素等）；

需設定可接受的限量標準（specifications），確保這些污染物不會干擾研究目的或結果。

特別注意：大豆類嚙齒類飼料中含有的植物雌激素（如染料木黃酮）可能影響發育毒性或內分泌干擾研究的結果，因此在相關研究中應謹慎選擇低雌激素或無大豆飼料。

2）溶媒/助懸劑/載體（Vehicle）

常用輔料包括：羥丙甲纖維素（HPMC）、羧甲基纖維素（CMC）、吐溫80、生理鹽水、植物油等；

要求：使用公認無毒、藥用級或分析純級別的材料；提供制造商的純度分析報告（Certificate of Analysis, CoA）；批次信息需記錄，并能與研究數據關聯。

3）混合前處理說明

若受試物需通過溶劑溶解、乳化或懸浮后再與載體（如飼料、水、灌胃液）混合，應詳細描述該過程。

包括：輔料名稱、濃度、配制方法、穩定性數據（如適用）。

2.飼料與飲水的質量控制實踐

1）飼料

通常由大型實驗動物飼料生產商供應；每批飼料均進行污染物檢測（如霉菌毒素、營養成分、雌激素活性物質）；檢測報告由試驗機構歸檔，并與具體研究關聯。

2）飲水

一般來源于市政飲用水系統，市政部門或第三方實驗室定期提供水質分析報告。

試驗機構可額外檢測：微生物（如細菌總數、大腸桿菌）；氯含量、pH值、重金屬等。

目的：確保動物房供水無污染、適于實驗動物長期飲用。

飼料和飲水的質量直接影響動物健康狀態及藥物反應，必須在方案中明確規格并持續監控。

3.GLP合規性要求：記錄審查與文檔留存

研究負責人（Study Director）和試驗機構管理層必須：定期審查飼料、飲水、溶媒等輔料的質量檢測記錄；書面記錄審查過程及對研究潛在影響的評估；將相關文件（如CoA、水質報告、內部檢測結果）作為原始數據的一部分歸檔。

FDA在GLP檢查中曾多次因以下問題發出483缺陷項：研究負責人未審查飼料/飲水污染物數據；未記錄審查結果或影響評估；無法證明輔料質量不影響研究完整性。

八、檢測、分析項目及其頻率的描述要求

1.核心內容：觀察、評估與操作的時間安排

研究方案中必須明確說明：將進行哪些類型的檢測、分析和測量（如臨床觀察、血液學、生化、組織病理學、心電圖等）；

每項操作的具體時間點和頻率（如給藥前、每周一次、末次給藥后24小時、恢復期結束等）。

這些內容共同構成研究的觀察計劃（Observation Schedule），是確保數據系統性和完整性的重要依據。

2.操作細節的呈現方式

詳細操作步驟（如采血技術、麻醉方法、解剖流程等）通常不重復寫入方案，而是引用試驗機構已有的標準操作規程（SOP）；在方案中注明“按SOP編號XXX執行”即可。

但以下與特定研究或評估相關的關鍵細節必須在方案中明確說明：

這些細節直接影響樣本質量和檢測結果可靠性，不能僅依賴SOP，需在方案中具體規定。

總之，建議使用表格形式列出所有檢測項目、時間點、頻率及樣本要求，提升可讀性；對關鍵毒性終點（如神經行為、生殖功能、免疫指標）的評估方法應特別詳盡；若某項檢測采用非標準方法或定制化流程，必須在方案中完整描述，不可僅引用SOP；所有引用的SOP應為現行有效版本，并在原始數據中可追溯。

九、非臨床GLP研究中需保存的記錄類型及法定/行業保留期限要求

1.需歸檔保存的記錄范圍（依據21 CFR 58.190）

為確保研究可完整重建（reconstruct the study），以下材料必須歸檔保存：

所有電子與紙質記錄原則上均應歸檔，除非明確不屬于“原始數據”（參見法規對原始數據的定義）。

2.記錄保存期限（依據21 CFR 58.195）

保存期限取決于研究用途及申報狀態，具體如下：

1）支持獲批上市申請的研究

適用情形：研究數據用于支持已獲FDA批準的藥品/器械上市申請（NDA、BLA、PMA等）；

保存期限：自FDA批準之日起，至少保存2年。

2）支持IND或IDE的研究

適用情形：研究用于新藥臨床試驗申請（IND）；

保存期限：自向FDA提交該研究數據之日起，至少保存5年。

注意：盡管IND/IDE本身未獲“最終批準”，但因其處于研發關鍵階段，監管要求更長的保存期。

3）未用于任何申報的研究

適用情形：研究完成后未提交給FDA用于任何申請（如早期篩選、終止項目）；

保存期限：自研究完成、終止或中止之日起，至少保存2年。

3.CRO實際操作慣例

多數CRO在協議中約定：研究結束后先由CRO保存1年；屆時聯系申辦方（Sponsor），確認檔案后續處置方式（繼續保存、轉移或銷毀）；此做法便于申辦方根據項目進展決定長期歸檔策略。

4.企業額外保留策略（超出法規最低要求）

部分公司出于以下考慮，選擇無限期保存（indefinite retention）：藥物未來可能拓展新適應癥；應對潛在監管問詢或訴訟；支持生命周期管理或專利糾紛；此類決策通常基于內部質量政策或風險管理框架。

十、非臨床GLP研究中方案批準的規范要求與各方職責

1.方案批準的核心要求

根據GLP規范，研究方案批準必須包含以下兩項關鍵信息：申辦方（Sponsor）；研究負責人（Study Director）。此過程也稱為“方案定稿”（protocol finalization），是研究正式啟動前的必要合規步驟。

2.簽署主體與責任分工

若使用電子簽名系統，需符合21 CFR Part 11等法規要求。

所有方案及后續修訂的申辦方批準記錄，必須保存在研究往來文件（study correspondence file）中，供未來核查或審計使用。

3.“申辦方”的定義因研究場所而異

可以參考OECD對申辦方與試驗機構的定義。

十一、統計方法描述要求

1. 撰寫責任

統計方法部分應由熟悉研究設計和所用統計軟件的專業統計人員撰寫。現代實驗室數據系統通常內置統計模塊或與專業統計軟件（如 SAS、R、JMP）集成。

2. 法規要求

GLP 法規（如 21 CFR Part 58或 OECD GLP）未強制規定具體統計方法；方法選擇由試驗機構和研究負責人（Study Director）根據科學合理性決定。

3. 常規實踐

所有成熟GLP實驗室均配備統計支持人員；

最常用方法：方差分析（ANOVA）；事后多重比較檢驗（Post-hoc tests，如 Dunnett’s test）；以同期對照組（concurrent control）為基準，評估受試物處理效應。

目的：確保數據分析方法科學、透明、可重復，并能有效識別劑量-反應關系或毒性信號。

十二、方案修訂與偏離的管理規范

方案修訂（Amendment）與偏離（Deviation）的管理

1. 方案修訂（Protocol Amendment）

定義：指研究啟動后（即研究負責人簽署方案之后）對原方案的有意、計劃性修改。

最佳實踐：采用“重發完整方案 + 變更高亮”方式，提升可讀性與合規性。

2. 方案偏離（Protocol Deviation）

監管風險

FDA 在檢查中常因以下問題發出483缺陷項：研究負責人未及時確認或記錄偏離；未評估偏離對研究完整性的影響；偏離頻發但無根本原因分析。

關鍵原則：所有偏離必須透明、及時、可追溯、有評估。

引自：《Good Laboratory Practice for Nonclinical Studies》一書

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